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限制酶起作用的条件
凡能影响蛋白质的理化因素都能影响酶的活性。因此温度、酸碱度、重金属离子都能影响酶的活性。高温、强酸、强碱等因素均可引起酶丧失催化能力。
DNA纯度 在DNA样品中若含有蛋白质，或没有去除干净制备过程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高浓度金属离子，均会降低限制酶的催化活性，甚至使限制酶不起作用。
主要从原核生物中分离纯化出来的。迄今为止已从近300种不同的微生物中分离出了约4000种限制酶。 作用： 能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
限制酶是识别特定的核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶。根据酶的功能特性、大小及反应时所需的辅助因子，限制性内切酶可分为两大类，即I类酶和Ⅱ酶。
是在第6个堿基排列的部位按箭头的位置切断（A：腺苷，C：胞苷，G：鸟苷，T：胸苷，P：磷酸）：另一方面，该菌含有的修饰酶在上面排列的腺苷上（带*号的）使其甲基化，一旦甲基化后限制酶就不起作用了。
限制酶介导整合转化
限制酶的生物学功能在于降解外面侵入的DNA而不降解自身细胞中的DNA，因自身DNA的酶切位点经修饰酶的甲基化修饰而受到保护。限制酶较为稳定，常用的约100多种并已转化为商品。
与胞外的溶酶体酶结合，通过受体介导的内吞作用，将酶运送至前溶酶体中，M6P受体返回细胞质膜，反复使用。②还存在不依赖于M6P的分选途径，溶酶体膜蛋白不具有M6P标志，如T细胞溶酶体中的酶和酸性磷酸酶的分选。
这是因为基因组文库的基因和cDNA的基因不会同时出现（可以理解为：基因组文库的目的基因产生基因mRNA后，只提炼该mRNA逆转录形成cDNA。此时的目的基因已经不在提取液中了，所以限制酶不会对其有作用）。
人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。
限制酶有什么作用?
1、限制酶：可以识别并附着特定的脱氧核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割。聚合酶：可以专门生物催化合成脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的一类酶。
2、限制酶是细菌的一种防御性工具，当外 源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切 割掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原 核生物中主要起到切割外源DNA，使之失效，从而达到保护自身的目的。
3、限制酶的作用主要是用来提取目的基因，这主要是由酶的作用特性来决定的。限制性核酸内切酶是可以识别特定的核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶。
